В отличие от реакций гемагглютинации и преципитации, описанных выше, соединение антигена с антителом при РСК происходит только в присутствии третьего компонента - комплемента. Реакция образования комплекса антиген-антитело-комплемент невидимая. Чтобы выявить указанное взаимодействие компонентов реакции, используют дополнительную индикаторную систему, наглядно отражающую результат взаимодействия в первой системе. Таким образом, в РСК участвуют две системы: 1) бактериолитическая (диагностическая) и 2) гемолитическая (вспомогательно индикаторная), подтверждающая связывание комплимента в первой системе. Ранее в качестве антигена использовали взвесь бактерий, и в положительных случаях происходил их лизис (бактериолиз), поэтому первая система получила название бактериолитической.

РСК осуществляют в два этапа. Сначала готовят бактериолитическую систему. В пробирках смешивают по 0,5 мл исследуемой инактивированной сыворотки с антигеном, добавляют комплемент в строго определенном количестве (титре). Смесь антиген-антитело (сыворотка) - комплемент (бактериологическая система) помещают в термостат при 37-38°С на 20-40 минут.

Далее приступают ко второму этапу. Во все пробирки добавляют компоненты второй гемолитической системы и вновь термостатируют 15-20 минут. Затем учитывают предварительный результат (есть или нет гемолиза), оставляют при комнатной температуре до следующего дня и производят окончательный учет РСК (читают реакцию).

Отсутствие гемолиза (положительный результат) свидетельствует, что в испытуемой сыворотке имеются антитела, специфичные взятому антигену, комплекс антиген-антитело в первой системе образовался, комплемент связался. Добавляют компоненты второй системы - гемолизин и эритроциты, которые по отношению друг к другу тоже являются антигеном (эритроциты) и антителом (гемолизин) и взаимодействуют в присутствии комплемента.

Если же в исследуемой сыворотке нет антител, специфичных взятому антигену, комплекс антиген-антитело не образуется и комплемент в первой бактериолитической системе не связывается, остается в пробирке свободным, тогда при добавлении второй гемолитической системы комплемент взаимодействует с комплексом антиген-антитело (гемолизин-эритроциты) и происходит гемолиз (лизис эритроцитов). Диагностический результат отрицательный. Таким образом, в РСК участвуют 5 компонентов: антиген, антитело (исследуемая сыворотка), комплемент, гемолизин, взвесь эритроцитов баран. Для разведения всех компонентов используется электролитная среда - физиологический раствор.

Материалы и оборудование. Пробы сывороток, две заведомо позитивные и две нормальные сыворотки для контроля (инактивируются в разведении 1:10 для разрушения собственного комплемента на водяной бане при 56-58°С в течение 30 минут), антиген в разведении согласно титру (указывается биофабрикой) комплемент (разведение устанавливается в ходе титрации), гемолизин в рабочем титре, взвесь эритроцитов барана в разведении 1:40, физраствор, градуированные пипетки, пробирки, водяная баня, термостат.

Ход работы. Перед каждой постановкой РСК производят титрацию комплемента (проверяют его активность и определяют титр - оптимальное количество, необходимое для данной реакции). Титрацию комплемента проводят в бактериолитической и гемолитической системах отдельно.

Готовят исходное разведение комлемента 1:20 (1 мл комплемента+19 мл физраствора), гемолизин в рабочем титре, взвесь эритроцитов барана (1:40), физраствор. В пробирки, поставленные в один ряд в штатив, разливают градуированной пипеткой разное количество комплемента, увеличивая дозу в каждой последующей пробирке на 0,03 мл (0,13; 0,16; 0,19; 0,21┘до 0,43 мл). Затем выравнивают количество раствора в каждой пробирке до 0,5 мл (т.е. добавить в первую пробирку 0,37 мл, далее 0,34 мл физраствора и т.д.). После этого добавляют во все пробирки по 0,5 мл эритроцитов барана и по 1 мл физраствора. Все пробирки встряхивают и помещают в водяную баню при 37-38°С на 10-15 минут. По окончании этого времени учитывают результат, т.е. определяют титр комплемента - наименьшее количество его, обеспечившее полный гемолиз (например 0,22 или 0,25). Учитывать начинают с пробирки с наибольшим содержанием комплемента, где прежде всего должен произойти гемолиз. В найденном титре комплемент используют для постановки РСК.