Материалы и оборудование. Кровь разных видов животных, микроскоп, счетная камера Горяева, смеситель крови для лейкоцитов, покровные стекла, пробирки, микропипетки на 20 мкл, 5% раствор натрия цитрата, физраствор, этиловый спирт, ксилол, вата, марля.

Ход работы: Для освоения методики определения общего количества лейкоцитов в счетной камере целесообразнее пользоваться в данной работе кровью, стабилизированной цитратом натрия (или другим антикоагулянтом). Кровь набирают в смеситель для лейкоцитов до метки 0,5 и разводят в 20 раз физраствором, набирая его до метки II.

Разбавляют кровь для подсчета лейкойцитов также в маленьких видалевских пробирках, в которые помещают 0,4 мл жидкости Тюрка, состоящей из 1-2 мл ледяной уксусной кислоты, 1 мл 1% водного раствора генцианвиолета и 100 мл дистиллированной воды. Уксусная кислота в этой жидкости лизирует эритроциты, а генцианвиолет окрашивает ядра лейкоцитов.

Микропипеткой набирают 0,02 мл крови, осушают кончик пипетки салфеткой и вносят кровь в пробирку с разбавителем. Не вынимая микропипетки из пробирки, промывают ее несколько раз верхней частью раствора. Содержимое пробирки хорошо смешивают и получают разбавление крови в 20 раз. Пробирку закрывают пробкой и оставляют на 4 мин.

После разбавления крови из пробирки с помощью стеклянной палочки или пипетки берут 1-2 капли жидкости, вносят ее в счетную камеру Горяева под притертое покровное стекло и приступают к подсчету. Визуально контролируют, чтобы в камере под стеклом не было пузырьков воздуха.

Камеру ставят на столик микроскопа и через 1-2 минуты, когда клетки осядут и прекратят движение, начинают считать их под малым увеличением (х400) при уменьшенном отверстии диафрагмы, опущенном конденсоре. Клетки считают в 100 больших (1600 малых) квадратах, расположенных по диагонали, т.к. при таком способе подсчета нивелируется неравномерность распределения клеток в камере.

Для получения более точного результата принято подсчитывать все клетки не только внутри малого квадрата, но и расположенные на его сторонах слева и сверху, а также клетки, соприкасающиеся с этими сторонами.

После подсчета количество лейкоцитов определяют по формуле 3:

                  (3),

где - Х - количество лейкоцитов в 1 мкл крови;

Н - количество лейкоцитов, подсчитанное в 100 больших квадратах;

4000 - коэффициент перевода к объему в 1 мкл крови;

20 - разведение крови;

1600 - количество малых квадратов.

Для упрощения расчета при разведении крови в 20 раз можно подсчитанное количество лейкоцитов в 100 больших квадратах умножить на 50.

Среднефизиологическое количество лейкоцитов у разных сельскохозяйственных животных показано в прил. 3.