Лейкограммой (лейкоцитарной формулой) называется процентное соотношение между отдельными видами лейкоцитов в крови.

Этот метод используется в клинической практике для выявления аномальных сдвигов в лейкоцитарной формуле и оценки состояния организма. При расчете лейкоцитарной формулы и ее анализе учитывают соотношения в крови лейкоцитарных клеток разных типов.

Анализ лейкоцитарной формулы имеет большое диагностическое и прогностическое значение при оценке функциональной способности кроветворных органов. При различных патологических процессах и в зависимости от их силы, глубины, характера и локализации лейкоцитарная формула может существенно изменяться. Все изменения лейкоцитарной формулы сводятся главным образом к следующему: 1) к увеличению процентного содержания одних форм клеток белой крови за счет уменьшения в той или иной степени других форм; 2) к появлению молодых незрелых лейкоцитов; 3) к структурным изменениям самих клеток.

Ход работы:

Приготовление мазков.

На сухое обезжиренное предметное стекло ближе к короткой стороне наносят небольшую каплю крови стеклянной палочкой или непосредственно из места укола пальца и оставляют стекло в горизонтальном положении. Шлифованное стекло, которым будет сделан мазок, ставят на предметное стекло под углом 30-45о на 1-2 мм перед каплей крови и движут назад так, чтобы оно коснулось крови и капля распространилась по всему короткому ребру шлифованного стекла. Затем быстрым движением делают мазок.

Мазки высушивают на воздухе и маркируют. Высохший мазок должен быть равномерно тонким, желтоватого цвета, занимать около 2/3 общей длины стекла и заканчиваться "метелочкой".

Фиксация.

Фиксация мазков необходима, чтобы впоследствии клетки не претерпели каких-либо морфологических изменений и чтобы предотвратить повреждение мазка при дальнейшем окрашивании.

Фиксируют мазки в метаноле, либо в 75%-ном этаноле, либо в смеси Никифорова (1 часть этанола: 1 часть эфира) в течение 5 мин. либо 30-40 мин. соответственно. Затем высушивают на воздухе. Фиксированные мазки окрашивают классическим способом, поместив в кювету с красителем Романовского-Гимзы на 25-40 мин. Краситель Романовского-Гимзы состоит из щелочной и кислой частей. Щелочная часть - азур II, а кислая часть - эозин. Азур II окрашивает в ярко-синий цвет, эозин - в розово-красный.

Чтение мазка.

На сухой окрашенный мазок нанести каплю иммерсионного масла и, закрепив препарат в препаратоводителе, просматривать его при окуляре 7(10) и объективе 90. Для лучшей освещенности поля зрения конденсор поднять до конца, а диафрагму открыть.

Необходимо помнить, что даже в идеально подготовленных мазках лейкоциты распределяются неравномерно:

- нейтрофилы

- эозинофилы                  - обычно располагаются по краям мазка;

- базофилы

- лимфоциты

- моноциты                                   - в центре мазка.

В начальных частях мазка находится большее количество клеточных элементов, а в конечных - меньше.

При описании лейкоцитарной формулы пользуются буквенными обозначениями: Б - базофилы, Э - эозинофилы, М - миэлоциты, Ю - юные нейтрофилы, П - палочкоядерные нейтрофилы, С - сегментоядерные нейтрофилы, Л - лимфоциты, М - моноциты. Изменения лейкоцитарной формулы могут быть в сторону как увеличения, так и уменьшения тех или иных форм лейкоцитов.

При просмотре рекомендуется руководствоваться атласом клеток крови, описанием клеток (прил.5).
При определении вида клеток рекомендуется сомнительные из них относить или в ту группу, которая представлена наибольшим числом, или в группу "атипичные клетки".

Произвести подсчет 200 клеток (по 50 в каждом углу) в мазке крови, передвигая препарат согласно рисунка (прил.6) (в каждом углу 3-4 поля зрения к середине, 2 поля вправо, 3-4 к краю и т.д.).

Результат подсчета представить в виде табл. 1.

Подсчитанную сумму отдельных форм лейкоцитов разделить пополам и, получив их процентное содержание, вывести лейкоцитарную формулу. Полученные цифры сверить с данными, приведенными в прил. 7.
Сделать вывод о состоянии системы белой крови у обследуемого животного.