Диагностика кокковых инфекций

Диагностика стафилококкозов


Стафилококки – это шаровидные, грамположительные, микроорганизмы. Являются факультативными анаэробами, хорошо растут при температуре 30-37°С, рН среды 7,2 – 7,4, не прихотливы к питательным средам, могут расти при повышенном содержании натрия хлорида.
Стафилококки относятся к: тип Protophita, Класс Schizomycetes, Порядок Eubacteriales, Семейство Micrococcaceae, Род Staphilococcus, вид S.aureus, S. epidermidis, S. saprophiticus.
Микробиологическая диагностика стафилококковой инфекции включает в себя 3 этапа:
1 этап. Складывается из 2-х приемов:
  1. Из исследуемого материала готовят мазки на предметных стеклах и окрашивают их по Граму.
    В мазках стафилококки могут располагаться единично, попарно, в виде коротких цепочек или гроздевидных скоплений. Таким образом, можно предположить наличие в исследуемой пробе стафилококков.
  2. Первичный посев патологического материала производят на:

2 этап. Заключается в изучении культуральных свойств выросших колоний стафилококков на плотных и жидких питательных средах.
  1. На плотных питательных средах стафилококки образуют круглые, выпуклые, с гладкой поверхностью и ровным краем колонии, диаметром от 2 до 7 мм, не прозрачные. Цвет колоний зависит от типа вырабатываемого фермента (Staphilococcus aureus – образует колонии белого или золотистого цвета).
  2. На кровяном агаре – патогенные штаммы стафилококков формируют широкую зону бетагемолиза.
  3. На желточно - солевом агаре √ во круг колоний стафилококков, обладающих лецитиназной активностью (Staphilococcus aureus, Staphilococcus xilosus) образуются просветления среды в виде радужного венчика, видимого при косом освещении.
  4. На жидких питательных средах (МПБ) стафилококки дают вначале сильное помутнение среды, а затем значительный рыхлый осадок.

Затем из культур выросших на питательных средах готовят мазки и окрашивают их по Граму. При наличии в мазке типичных грамположительных кокков, оставшуюся часть колоний пересевают на скошенный МПА для накопления чистой культуры.
3 этап Заключается в проведении видовой идентификации стафилококков на основании комплекса биологических свойств выделенной культуры и определение чувствительности к антибиотикам.
  1. Реакция на каталазу. Проводится с целью дифференциации стафилококков от стрептококков. Стафилококки синтезируют фермент каталазу – поэтому они являются каталазоположительными микроорганизмами, а стрептококки – каталазоотрицательными.
    Постановка реакции Проводится с целью дифференциации стафилококков от стрептококков. Стафилококки синтезируют фермент каталазу – поэтому они являются каталазоположительными микроорганизмами, а стрептококки – каталазоотрицательными.
    Положительная реакция – выделение пузырьков газа (при присутствии каталазоположительных микроорганизмов).
    Отрицательная реакция – пузырьки газа не выделяются (каталазоотрицательные микроорганизмы).
  2. Реакция плазмокоагуляции.Основная масса патогенных стафилококков способна синтезировать фермент плазмокоагулазу (Staphilococcus aureus), который является одним из важнейших показателей патогенности, так как 90% плазмокоагулирующих стрептококков, способны продуцировать энтеротоксин.
    Постановка реакции. Суточную агаровую культуру стафилококка петлею суспензируют в 0,5 мл разведенной 1:5 цитратной кроличьей плазме. Пробы помещают в термостат при температуре 37оС. Реакцию учитывают через 1, 2, 4 и 18 часов.
    Положительная реакция – появление на дне пробирки студнеобразного сгустка.
    Реакцию плазмокоагуляции можно провести ускоренным методом на стекле. Для этого каплю, разведенной 1:10, кроличьей плазмы растирают с культурой стафилококка, при положительной реакции образуется агглютинат.

  3. Дополнительные реакции Кроме этого, патогенные стафилококки в отличии от непатогенных выделяют гемолизин (зона бета–гемолиза на кровяном агаре), фибринолизин, гиалуронидазу, ДНК–азу, желатиназу, лецитиназу (появление зоны просветления на желточно-солевом агаре), ферментируют манит.

  4. Биопроба или дерматонекротическая проба. Проводится в необходимых случаях для подтверждения токсигенных свойств выделенного стафилококка ( для выявления некротоксина). Биопробу ставят на кроликах .
    Кролику выстригают шерсть на каждом боку в виде 2–х полос и вводят внутрикожно 0,2 мл суспензии полученной из смыва 16 – 20 часовой культуры стафилококка на МПА. Учет реакции проводят через каждые 24 часа, в течении 4 – 5 суток.
    Положительная реакция – отмечают некроз, покраснение, или инфильтрацию кожи в местах введения (патогенный стафилококк). Отрицательная реакция – отсутствие видимых изменений кожи (не патогенный стафилококк).
    На одном кролике можно поставить 4 – 5 проб.


Совокупность этих признаков позволяет обеспечивать дифференциацию патогенных стафилококков от непатогенных.
← ↑ →